SDS-PAGE一步法凝膠快速制備試劑盒時,有哪些細節(jié)需要把控?
更新時間:2025-08-18 點擊次數(shù):65
使用 SDS-PAGE 一步法凝膠快速制備試劑盒時,還可從環(huán)境、設備清潔、試劑特性等角度把控細節(jié),進一步保障實驗質(zhì)量:
環(huán)境因素把控
濕度控制:環(huán)境濕度對凝膠聚合有潛在影響,在高濕度環(huán)境下,凝膠表面易吸收水分,導致凝膠邊緣出現(xiàn)模糊、不規(guī)則現(xiàn)象,影響電泳結(jié)果。建議在相對濕度 40%-60% 的環(huán)境中進行凝膠制備,若實驗室濕度較高,可使用除濕設備調(diào)節(jié)。
氣流影響:制備凝膠時應避免在通風櫥強氣流下或風扇直吹的環(huán)境中操作,強氣流會加速凝膠溶液表面水分蒸發(fā),造成凝膠表面干裂,還可能使凝膠溶液產(chǎn)生波動引入氣泡,影響凝膠均一性。
設備深度清潔
電泳槽定期維護:電泳槽使用后,需清洗殘留的緩沖液和凝膠碎屑。長期不清理,殘留物質(zhì)會附著在電泳槽內(nèi)壁,影響后續(xù)凝膠灌注的平滑度,甚至可能與凝膠發(fā)生反應,導致條帶異常。清洗時可用溫和的去污劑浸泡,再用大量蒸餾水沖洗干凈,晾干備用。
移液槍校準與清潔:定期對移液槍進行校準,確保量取試劑體積準確。同時,每次使用后及時清理移液槍槍頭殘留試劑,避免干涸堵塞,若移液槍不慎接觸污染試劑,需拆卸進行深度清潔,防止交叉污染影響凝膠制備。
試劑特性利用
觀察試劑顏色變化:部分試劑盒中的預混試劑可能含有顯色劑,用于指示試劑是否變質(zhì)或成分是否正常。使用前觀察試劑顏色,若與標準顏色存在明顯差異,如褪色、變色等,可能表明試劑失效,應謹慎使用。
利用試劑密度差異:在灌注凝膠時,若凝膠溶液與電泳槽壁之間存在小氣泡難以去除,可利用溶液密度差異。用微量移液器吸取少量密度稍大的甘油溶液,沿氣泡邊緣緩慢注入,甘油會將氣泡擠出,且甘油對凝膠聚合和電泳過程無明顯不良影響。